长时间延时成像技术

上图为我们展示了一个设计巧妙的半封闭状态小室，该小室采用4 层加热设计：底部、侧壁水浴、顶部和物镜套环加热，4 层加热维持整个系统的热平衡，还为系统提供了湿度保证。这种半密闭式小室还设计了CO2 等气体的进入接口和补水口，可以将系统的酸度维持在适宜细胞生存的范围。 

对于短时间的实验，如十分钟左右的延时摄影，温度引起的焦平面偏离不是非常明显，因此这种情况下一般可以忽略Z 轴漂移对成像的影响。但有时活细胞实验需要进行更长时间的如半天或24 小时以上的实验，在整个实验过程中显微镜、相机、光闸、滤色片转轮、照明、活细胞小室和电脑等都会持续造成热不稳定。因此在整个实验过程中如果能够有一个持续监视焦平面情况并反馈给显微镜Z 轴控制装置的设备，那么实验的结果将会得到很好的保证。

上图为我们展示了一个设计巧妙的半封闭状态小室，该小室采用4 层加热设计：底部、侧壁水浴、顶部和物镜套环加热，4 层加热维持整个系统的热平衡，还为系统提供了湿度保证。这种半密闭式小室还设计了CO2 等气体的进入接口和补水口，可以将系统的酸度维持在适宜细胞生存的范围。  对于短时间的实验，如十分钟左右的延时摄影，温度引起的焦平面偏离不是非常明显，因此这种情况下一般可以忽略Z 轴漂移对成像的影响。但有时活细胞实验需要进行更长时间的如半天或24 小时以上的实验，在整个实验过程中显微镜、相机、光闸、滤色片转轮、照明、活细胞小室和电脑等都会持续造成热不稳定。因此在整个实验过程中如果能够有一个持续监视焦平面情况并反馈给显微镜Z 轴控制装置的设备，那么实验的结果将会得到很好的保证。    

红外反射光监视和补偿系统是近一两年开发的新技术，是一种带负反馈装置的Z 轴监视和补偿系统。它通过监视经过物镜照射到培养皿的弱红外激光或LED 光的反射斑形状或强度来确定标本是否离焦。反射平面位于存在折射率差的介质交界面处，如空气和玻璃、玻璃和溶液的交界处。当反射斑产生变化时，监控装置将信息传递给Z 轴控制装置，通过移动Z 轴使反射斑恢复为最初设定状态，而这种状态的Z 轴位置和之前的Z 位置相同。 这种方法实际上监视的是物镜和培养容器底部的距离。长时间活细胞实验监视的基本上是贴壁较好的细胞，所以这种方法中能够引入漂移的因素只有容器底部的膨胀和细胞与容器底部的相对位移。

 

文章来源于：http://www.pelttech.com/item_99_51_0.shtml