荧光显微镜使用注意事项

 荧光显微镜是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观察。荧光显微镜广泛应用于生物，医学等领域。

（1） 荧光显微镜一般分为透射和落射式两种类型。

 a. 透射式：激发光来自被检物体的下方，聚光镜为暗视野聚光镜，使激发光不进入物镜，而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮，而高倍则暗，在油浸和调中时，较难操作，尤以低倍的照明范围难于确定，但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。

 b.落射式：透射式目前几乎被淘汰，新型的荧光显微镜多为落射式，光源来自被检物体的上方，在光路中具有分光镜，所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用，不仅便于操作，而且从低倍到高倍，可以实现整个视场的均匀照明。

（2） 荧光镜检术的注意事项

a. 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。

b. 作油镜观察时，应用"无荧光油"。

c. 荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。

d. 电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。

  荧光拍摄通常使用制冷CCD，因为制冷CCD可以减少背景噪声，对低荧光信号采集很有好处，特别是像单分子成像。采集强荧光信号不一定要制冷CCD，可使用黑白相机，彩色相机不适合荧光采集，因为其敏感度低、分辨率也低，除非荧光信号很高，对分辨率要求不高，才适合用彩色相机。

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